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1)头孢西丁敏感试验:AmpC酶可以水解头孢西丁(FOX),即产AmpC酶的菌株对头孢西丁耐药。而超广谱β内酰胺酶(ESBLs)等其他β内酰胺酶一般不能分解头孢西丁,即产ESBLs的菌株对头孢西丁敏感。利用AmpC酶的这一特性,可以对产AmpC酶的菌株进行初步筛选。
2)三维试验:三维试验也是利用AmpC酶可以水解头孢西丁的原理,先用冻融法或超声粉碎法将待检菌株中的β内酰胺酶提取出来(粗提),观察这种酶的粗提物对头孢西丁的抑制情况。如果粗提物中有AmpC酶存在,即可抑制头孢西丁的活性,使其周围对头孢西丁敏感的大肠埃希菌得以生长;反之,大肠埃希菌受头孢西丁的抑制则不能生长。
mCIM+eCIM无法检测报告的是
AmpC酶为主要由染色体介导的BushⅠ型β-内酰胺酶(亦称诱导酶或C类头孢菌素酶),其产酶基因已开始由染色体向质粒扩散。它是导致革兰阴性菌尤其是阴沟肠杆菌对1~3代头孢菌素、单环β-内酰胺酶、头霉素类及含酶抑制剂的复合制剂耐药的重要原因。首选4代头孢(头孢吡肟)和碳青霉烯类抗生素。
ampc酶的检测方法不包括
mCIM+eCIM无法检测报告的是高产ESBL或AmpC酶。
1. 碳青霉烯酶阳性:美罗培南抑菌圈直径为6-15mm 或直径为16-18mm但抑菌圈内有散在菌落。若待测株产生碳青霉烯酶,纸片中的美罗培南被该酶降解,结果为无抑菌圈或抑制大肠埃希菌ATCC 25922的活性降低;
2. 碳青霉烯酶阴性:抑菌圈直径≥19mm。若待测菌株不产碳青霉烯酶,纸片中的美罗培南不被水解,仍能抑制大肠埃希菌ATCC 25922的生长;
3. 碳青霉烯酶中性:抑菌圈直径为16-18mm,或直径为≥19mm但抑菌圈内有散在菌落。无法判断是否存在碳青霉烯酶;
.直接法:将试验菌株制成浊度为0.5麦氏单位的菌悬液,用棉棒均匀涂布于MH平板上。将35mm长的双面刀片经火焰消毒后,在已生长试验菌株的血平板上轻压,使刀口均匀地沾上试验菌株。注意不要划破琼脂表面。然后将刀口向下,垂直插入已涂布试验菌株的MH平板。刀口插入后位置不要移动。再轻轻拔出刀片使MH平板上的刀口切割线自然闭合。刀口菌量不宜过多,以免溢出琼脂表面。随后在切割线中心,距切割线3mm处贴上头孢西丁纸片。将MH平板放入35℃孵箱过夜。
2.间接法:将ATCC25922大肠埃希菌制成0.5麦氏单位的菌悬液,均匀涂布于MH平板。其他操作同直接法。
结果判断:如果试验菌切割线附近的抑菌圈缩小或变形均提示头孢西丁失活,为头孢西丁三维试验阳性,即1型酶阳性。但这种方法不能区别是诱导酶还是去阻遏表达的酶。
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我是零碳号的签约作者“悦琳琳”
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